Ministerio de Cultura y Educación
Universidad Nacional de San Luis
Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia
Departamento: Bioquimica y Cs Biologicas
Área: Morfologia
(Programa del año 2007)
I - Oferta Académica
Materia Carrera Plan Año Periodo
TÉCNICA HISTOLÓGICA ANAL. BIOLOGICO 15/04 2 1c
II - Equipo Docente
Docente Función Cargo Dedicación
MOHAMED, FABIAN HEBER Prof. Responsable P.ADJ EXC 40 Hs
DOMINGUEZ, NORA SUSANA Prof. Colaborador P.ASO EXC 40 Hs
SCARDAPANE, LUIS ANTONIO Prof. Colaborador P.TIT EXC 40 Hs
AGUILERA MERLO, CLAUDIA ISABEL Responsable de Práctico JTP EXC 40 Hs
FILIPPA, VERONICA PALMIRA Responsable de Práctico A.1RA SEM 20 Hs
RODRIGUEZ, HUGO ALBERTO Responsable de Práctico JTP SIM 10 Hs
CHAVES, EDUARDO MAXIMILIANO Auxiliar de Laboratorio A.2DA SIM 10 Hs
III - Características del Curso
Credito Horario Semanal Tipificación Duración
Teórico/Práctico Teóricas Prácticas de Aula Práct. de lab/ camp/ Resid/ PIP, etc. Total B - Teoria con prácticas de aula y laboratorio Desde Hasta Cantidad de Semanas Cantidad en Horas
Periodo
100 Hs. 40 Hs.  Hs. 60 Hs. 7 Hs. 1 Cuatrimestre 12/03/2007 15/06/2007 14 100
IV - Fundamentación
DESCRIPCIÓN DE LA ASIGNATURA: El Curso Técnica Histológica comprende el desarrollo de las diferentes técnicas que se utilizan en el Laboratorio para el estudio de diversas muestras de origen animal a nivel de microscopía óptica y electrónica. Durante el desarrollo del Curso el alumno adquirirá destreza en lo referente a la organización, instrumental necesario, reactivos necesarios en un Laboratorio de Histología, como así también en técnicas histológicas convencionales, histoquímicas e inmunohistoquímicas. Se darán los fundamentos de microscopía óptica, electrónica y sus diferentes variantes.
V - Objetivos
OBJETIVOS: Estudiar las técnicas y metodologías para la obtención de especimenes histológicos y su diagnóstico al microscopio óptico.
VI - Contenidos
CONTENIDOS MÍNIMOS: Organización tisular de los mamíferos. Distintos tipos de tejidos, clasificación, estructura e histoarquitectura tisular. Técnicas Histológicas: metodologías, fundamentos y alcances. Microscopía óptica: fijación, clasificación de los fijadores. Deshidratación e inclusión. Preparación de cortes y extendidos. Coloración: basofilia y acidofilia, meta y ortocromasia. Métodos histoquímicos, citoquímicos e inmunohistoquímicos. Microscopio de luz: fundamento. Unidades en microscopía. Concepto generales sobre: microscopía de fase, de polarización, campo oscuro y fluorescencia. El principio de la microscopía confocal, electrónica de transmisión y barrido.


PROGRAMA ANALÍTICO DE EXAMEN:


Bolilla 1. Organización tisular de los mamíferos. Distintos tipos de tejidos, clasificación, estructura e histoarquitectura tisular. Obtención de muestras. Precauciones. Generalidades de la técnica histológica. Fijación. Concepto, generalidades y condiciones para lograr una correcta fijación. Clasificación y propiedades de los reactivos fijadores. Artificios de fijación.


Bolilla 2. Inclusión de las muestras biológicas: Generalidades. Tratamiento preliminar de las muestras: deshidratación. Reactivos deshidratantes y aclarantes. Medios de inclusión; parafina, resinas epoxídicas. Moldes de inclusión. Errores de inclusión.


Bolilla 3. Métodos para ejecutar los cortes. Generalidades. Micrótomos: Usos y cuidados. Micrótomo de deslizamiento y rotación. Micrótomo de Congelación. Cuchilla ó navaja, afilado y asentado. Tipos, cuidados y uso de las cuchillas. Confección de los cortes: Características de un buen corte. Estiramiento. Formas de recoger un corte. Pegado de las secciones histológicas. Medios de adhesión: Albúmina, gelatina. Artificios de seccionamiento.


Bolilla 4. Coloraciones. Generalidades. Colorantes. Composición química, comportamiento de los colorantes y clasificación. Acidofilia y basofilia. Ortocromasia y metacromasia. Coloración de Hematoxilina-Eosina. Preparación de la hematoxilina de Harris. Técnica tricrómica de Masson. Otros métodos tricrómicos de importancia. Montaje de las preparaciones coloreadas para preparados deshidratados (permanentes), Permount, Entellán, DPX, Polymount, etc. Montaje para preparados no deshidratados (temporarios); glicerina. Precauciones del montaje. Artificios de coloración.


Bolilla 5. Histoquímica: Concepto y generalidades. Técnica de ácido periódico de Schiff (PAS) para glucoproteínas. Sudán para lípidos. Impregnaciones metálicas, concepto y generalidades. Técnicas argénticas. Técnicas para el estudio de muestras óseas, conceptos generales. Método de descalcificación.


Bolilla 6. Inmunohistoquímica: Concepto y generalidades. Antígeno y Anticuerpo. Reacción Antígeno Anticuerpo. Anticuerpos primarios, secundarios y monoclonales. Marcadores enzimátcos y fluorescentes. Concepto de sensibilidad y especificidad de una prueba inmunohistoquímica. Técnicas directas e indirectas. Precauciones. Controles de calidad. Otras técnicas de importancia clínica.


Bolilla 7. Métodos para microscopia electrónica de transmisión y de barrido: Generalidades. Obtención y fijación de las muestras. Post-fijación. Inclusión. Ultramicrótomos. Cuchillas de diamante y vidrio. Cortes Finos y ultrafinos. Grillas. Contrastes, acetato de uranilo y citrato de plomo. Diferentes tipos de Microscopios ópticos: de fase, de polarización, campo oscuro, fluorescencia y confocal.


VII - Plan de Trabajos Prácticos
TRABAJOS PRÁCTICOS:

1- Laboratorio de Histología. Preparación de mezclas fijadoras.
2- Obtención de muestras y fijación para microscopía óptica.
3- Deshidratación de la muestra.
4- Inclusión de la muestra en parafina.
5- Cortes histológicos. Micrótomo de deslizamiento y rotación (Parte I).
6- Cortes histológicos (Parte II).
7- Preparación colorantes. Coloración de Hematoxilina-Eosina (Parte I).
8- Coloración de Hematoxilina-Eosina (Parte II).
9- Obtención de extendidos sanguíneos. Coloración de May Grünwall-Giemsa (MGG).
10- Preparación de reactivos y desarrollo de la técnica histoquímica de P.A.S.
11- Técnica inmunohistoquímica.
12- Microscopía electrónica: Ultramicrótomo y microscopio electrónico de transmisión.
VIII - Regimen de Aprobación
METODOLOGÍA DE ENSEÑANZA: Teórico-práctica (40% teoría/consultas y 60% de prácticas). Asistencia al 80% de los Trabajos Prácticos y evaluación integral al finalizar el Curso.
IX - Bibliografía Básica
[1] BIBLIOGRAFÍA:
[2] 1- Técnicas de Histología Animal. Martoja R. y Martoja-Pierson M. Edit. Toray-Masson. (Barcelona). 1970.
[3] 2- Histoquímica. Teórica y Aplicada. A.G. Everson Perase Edit. Aguilar. 1960.
[4] 3- Manual de Microscopía Electrónica para Biólogos. Mercer E.H. y Birbeck M.S.C. Edit. Blume. 1974.
[5] 4- Staining Methods for Sectioned Material. Lewis P.R. and Knight D.P. Edit. Audrey M. Glauert. Elsevier. 1977.
[6] 5- Introduction to Immunocytochemistry. Polak J.K. and Van Noorden S. Scientific Published. 1997.
[7] 6- Texto y Atlas de Histología. Gartner L. And Hiatt J.. 2002.
[8] 7- Bloom Fawcett Tratado de Histología. Don W. Fawcett. McGraw-Hill Interamericana. 1995.
X - Bibliografia Complementaria
[1]
XI - Resumen de Objetivos
 
XII - Resumen del Programa
 
XIII - Imprevistos